利来国际提供的人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC的培养说明书包含详细的细胞培养条件、处理步骤以及注意事项，为科研人员在细胞培养过程中提供必要的指导。

一、细胞培养条件

细胞名称：人高转移性肝癌细胞MHCC97H/LUC
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM+10%FBS+1%P
传代方法：首次建议1:2传代，传代情况每2天换液。
备注：请用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。如对比效果不佳，建议直接采购我们的完整培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞到货后，待培养至良好状态后，使用完整培养液灌满瓶子并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。在收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，并在超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行操作。显微镜下观察细胞生长情况，并拍照保存不同倍数的细胞状态（建议各保存40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，若不提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2培养。若细胞密度超过80%，即可进行以下传代步骤：
1. 去除培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞状况，若大部分细胞已变圆并开始脱落，立即在操作台轻敲几下培养瓶，加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 吹打细胞，确保其完全脱落后，吸出悬液并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞收缩情况，待细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，然后转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清后，将沉淀细胞与1ml的无血清冻存液（货号：C7001）混合均匀，转移至冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱储存，需转入液氮罐时，请在-80℃冰箱中保存24小时以上再进行转移。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶，并用75%酒精消毒冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，使用5ml完全培养基重悬细胞并接种至T25培养瓶，放置在37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。如果脱离较多，可收集培养液至离心管，1000RPM离心5分钟，利用上清液进行过渡培养（后期对比培养）。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应，离心处理后，按1:2比例进行分瓶传代与补充新的培养基至5-8ml/瓶，最后放入培养箱中培养。

五、售后条款

1. 关于细胞出现的问题，可以重发的情况与标准：
1. 运输途中出现细胞丢失、瓶身破损或培养液严重泄漏等问题，支持重发。
2. 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货细胞静置24小时后，或干冰运输细胞复苏48小时后，如大部分细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），支持重发。
4. 干冰运输的细胞复苏后24小时未开封期间发生污染情况，亦可重发。
5. 细胞活性问题需在7天内提供真实实验结果经过台盼蓝染色法鉴定，核实后重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天内请拍照，超出此时间视为产品合格。
7. 4-7天内如出现问题需提供前三天照片以及相关操作的详细记录，经过技术人员判定为我方责任的可重发，判定双方责任需协商处理或按合同价的50%收费重发。

2. 不予以重发的情况包括：
1. 客户造成细胞污染，不重发。
2. 不当操作导致细胞状态不佳，不重发。
3. 使用非推荐培养体系导致的问题，不重发。
4. 细胞状态不佳且未提供培养前3天照片的不重发。
5. 进行任何其它处理导致的细胞状态不佳，不重发。
6. 收到2天内未反馈的问题，不重发。
7. 根据具体情况而定。