在miRNA研究领域，常常涉及miRNA与基因靶向关系的验证。miRNA通过其种子序列（5’端第2-8个碱基）特异性结合mRNA的3'UTR区域，进而诱导细胞内沉默复合体介导的mRNA降解或抑制翻译过程。因此，为了研究这种相互作用，我们可以将目标基因的3'UTR区域（或结合位点下游500bp）插入荧光素酶报告基因载体luciferase的下游，并与miRNAmimics共同转染目标细胞。在加入底物后，我们检测荧光素酶活性的变化。如果荧光素酶活性显著下调，则表明该miRNA与靶基因3'UTR区域存在互动。

双荧光素酶报告基因检测在验证miRNA与靶基因3'UTR相互作用时，主要依赖于几个关键步骤：首先，通过生物信息学工具（如TargetScan、StarBase和miRanda等）分析特定靶基因的3'UTR序列，判断是否存在miRNA结合位点。接着，将预测能够与miRNA结合的靶基因3'UTR序列插入萤火虫荧光素酶载体中。当miRNA与插入序列结合后，会抑制荧光素酶的翻译，从而导致荧光值的降低，最终验证miRNA与靶基因的相互作用。

关于利来国际的双荧光素酶报告基因检测服务流程，我们需要遵循一系列详细的操作步骤。首先，准备HEK293细胞或指定的目的细胞，并选择合适的转染试剂，如HieffTrans® invitrosiRNA/miRNA转染试剂。接下来，使用Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit进行报告基因的检测试剂准备。

在实验步骤中，当选择在目标细胞中进行验证时，我们需要确保细胞的质粒瞬时转染效率达到40%以上。在细胞状态良好时，进行转染，转染后48小时收集细胞样品并进行裂解，随后进行荧光素酶活性检测。

在荧光素酶检测试剂盒的指导下，我们需将裂解产物离心处理，配置Renilla Luciferase Assay工作液，并按照仪器说明进行荧光素酶活性测定。常规检测分组包括对照组和不同实验组，以评估mimics与各组质粒的相互作用效果。

通过以上步骤，利来国际的双荧光素酶报告基因检测服务为基础研究及药物筛选提供了有效支撑，促进了相关领域的进展。

相关产品清单包括双荧光素酶报告基因检测试剂、转染试剂等，均为高品质，支持科研人员的实验需求。利用利来国际的产品，您将能够加速研究速度，提升工作效率。