利来国际推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理开发的高效检测试剂盒，具有以下显著特点：

产品特点

• 即开即用，用户只需提供样品DNA模板。
• 经过优化的引物组分，具备高灵敏度。
• 附带阳性对照，便于辨别假阴性样品。
• 引物设计高度特异，基于中间普雷沃菌DNA序列的保守区域，避免与其他生物样本DNA产生交叉反应。
• 可进行定性与定量检测，定量检测的线性范围至少可达5个数量级。
• 每套产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
• 本产品仅供科研用途。

使用方法

一、DNA提取

采用自选方法提取并纯化样品DNA，确保与市场上多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

为了避免污染，稀释操作必须在独立区域进行：

1. 标记6个离心管，编号为7，6，5，4，3，2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，获得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，并放置于冰上待用。
4. 依次在6号、5号管中进行相似操作，依次稀释至1×10E6和1×10E5拷贝/μL。
5. 重复上述步骤，直到获得6个不同稀释度的标准曲线样品。若不需制作标准曲线，只需将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制

为待检样品准备N+2个qPCR管，其中包括N个待检样品、1个阴性对照及6个阳性对照，向各PCR管中加入必要成分（具体见详细说明书，可向我们索取）。

四、添加模板

向qPCR管中添加2μL模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放入PCR扩增仪器进行扩增，详细扩增程序请参考说明书。

六、结果分析

若制作了标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，并推算待测样品DNA浓度的log值。若未制作标准曲线，可依据以下标准判定结果：

• 阳性对照：Ct值<30，存在明显的指数增长，呈现典型S型曲线。
• 阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显指数增长。
• 样本检测：Ct值<35，表示样本中存在婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值38或无Ct值，则为阴性；若Ct值在35-38范围，需进行复检，若结果依然在此范围且存在指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输与保存

产品应低温运输，保存于-20℃，保质期为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。选择利来国际，让您的实验更具保障和灵活性。