关于如何正确存储和冷冻血清以确保产品质量,以下是一些建议:
1. 血清的储存与冷冻
取出血清时,应首先将其放置于2~8℃的冰箱内进行融解,随后在室温下完全解冻。在融解过程中,请确保轻轻摇匀,以避免沉淀的形成。长时间在2-8℃保存可能导致血清中的蛋白质和脂蛋白聚集,进而产生沉淀或可见的混浊。因此,最推荐的存储温度为-20℃,并务必避免频繁的冻融。我们建议将血清存放于-20℃,如需在4℃保存,请控制在一个月以内。如果一瓶血清无法一次用完,可将其无菌分装至合适的灭菌容器再冷冻保存。
2. 血清中的沉淀物及处理方法
凝结的沉淀物通常由纤维蛋白和脂蛋白组成,这是正常现象,不会影响产品质量。想要去除沉淀物,可以通过离心(400g,1-2分钟)处理,或静置待其沉淀于瓶底,再小心转移至另一个无菌瓶。一般不建议使用过滤方法,因沉淀可能堵塞滤膜。大部分情况下,轻轻摇晃沉淀并加热至37℃即可使其重新溶解。因此,在使用产品时,将血清摇匀并升温至37℃,沉淀会自然消失。
3. 如何选择适合的血清
在国内普遍认为HYCLONE的血清质量较好。然而,根据我在北美的经验,国外普遍认为GIBCO的血清质量优于HYCLONE。并不是价格决定品质,这两种品牌的价格普遍偏高,对于一些不太敏感的细胞,国产血清已经足够。同时,由于国内HYCLONE和GIBCO并没有生产线,我们只能从代理商处购买,存在买到假货的风险。因此,我通常选择直接从厂家或可靠的经销商处购入。比如,Wisent等国外生物公司虽然在国内知名度不高,但其实其产品在国外已有良好口碑,并且在国内设有办事处,他们的血清质量与HYCLONE相当,且价格更加优惠,是值得考虑的选择。
4. 如何避免血清中出现沉淀
为了减少沉淀的产生,可以采取以下措施:
- 在冷冻血清时,需实时摇匀以保持温度和成分均一,减少沉淀生成。
- 血清分装时,应轻轻摇匀(注意不要产生气泡),以保持温度和成分均一。
- 切勿将血清直接从-20℃转入37℃,过大的温差易造成蛋白质凝聚和沉淀。
- 不应将血清在37℃放置过久,以免导致污浊及破坏不稳定成分,影响质量。
- 热灭活处理容易增加沉淀物,除非必要,建议避免此步骤。
- 如进行热灭活,请遵循56℃,30分钟的标准,并在过程中保持摇匀,避免温度过高或时间过长。
5. 小牛血清与胎牛血清的区别及注意事项
胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)是通过心脏穿刺从怀孕母牛身上采集而得,而小牛血清(Calf Serum, CS)则来自出生10至14天的小牛。两者在生长因子、贴附因子及激素等成分及比例上存在差异,使用目的和浓度亦有所不同。某些细胞需要胎牛血清才能生长,而另一些细胞则只需小牛血清,通常浓度在5%-10%之间,对于特殊需求可达到20%。
血清的存放和使用应注意以下几点:储存应在-5℃至-20℃,如存放在4℃不得超过一个月。冷冻时,应先将血清融解于2-8℃冰箱,并保持摇匀,最后加热至室温,切勿直接在37℃水浴中解冻。冷冻血清发色加深,粘稠度增加。在冷冻和热灭活后,血清应根据用量分装于-20℃保存,以避免反复冻融。如有需求,请联系我们利来国际!