培养条件：气相条件为95%空气和5%二氧化碳，培养温度设定为37℃。该细胞系，由Aaronson S建立，源自一名52岁肾癌女性患者。A498是一种人肾癌细胞系，广泛应用于癌症研究领域。该细胞系的上皮样形态使其成为研究肿瘤发生机制、药物筛选和抗癌疗法的理想选择。通过短串联重复序列（STR）分析进行细胞鉴定，以确保细胞株的真实性和遗传一致性，避免交叉污染。

传代推荐方法：初次传代建议采用1:2的分瓶比例，每2天更换培养液。为确保细胞生长良好，建议同时购买细胞与培养试剂包，以获得更优的价格优惠。

收到细胞后，请勿立即开启瓶盖。请及时核对培养瓶上的细胞名称是否与订购的一致，检查瓶身是否有破损或漏液等异常情况。如未发现问题，通过显微镜观察细胞生长状态，并拍摄多个倍数（推荐40x、100x、200x）进行保存。在此期间，前三天的照片为重要的售后依据，不提供照片则默认状态良好。

贴壁细胞的传代步骤如下：1. 去除培养上清液，使用不含钙镁离子的PBS润洗细胞1-2次；2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，将其放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。如细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲击培养瓶后添加5ml以上的完全培养基以终止消化；3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬；4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中。

悬浮细胞的传代步骤包括：1. 半换液法：将培养瓶竖立于培养箱静置1小时，轻轻吸去约3ml培养基，随后补充3ml的完全培养基。如培养基变色较慢，可直接加500ul左右FBS；传代时可补充5ml培养基，分成两个培养瓶培养。一般传代3次后可进行一次离心以去除死细胞；2. 离心换液法：如果需要分瓶，将细胞悬液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后重悬，并按1:2比例分到新T25瓶中，添加6-8ml新制备的完全培养基以维持细胞生长活力。后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

细胞冻存与复苏：1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗；2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞形态，待细胞收缩变圆后加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打后将悬液转移至离心管中，1000RPM离心5分钟；3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管；4. 将冻存细胞存入-80℃冰箱，若将其转入液氮罐需在-80℃存放24小时以上。

细胞复苏时，1. 从液氮中取出冻存管并快速置于37℃水浴中解冻，擦拭冻存管外壁；2. 将冻存管内的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；3. 弃去上清，将细胞重悬并接种至T25培养瓶中，放于37℃、5%CO2培养；4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

注意事项：运输过程中部分细胞可能存在脱落现象，这是正常的。如细胞脱离较多，可将培养液收集至离心管中，进行离心处理，然后用胰酶轻轻重悬、消化后，加培养基终止反应。再进行离心，去上清液后重悬，以1:2比例分瓶培养。

关于细胞问题的重发条件：1. 运输过程出现细胞丢失、破损、重大泄漏等情况可重发；2. 收到后48小时内如发生污染，需提交实验结果核实后重发；3. 常温和干冰货物在一定时间内细胞未存活可重发；4. 初次收到的细胞，如在指定时间内未呈现异常则视为合格；5. 7天内出现活性问题需真实数据支持。具体情况可与技术人员协商处理。

此次交流体现了利来国际对细胞培养及其应用的认真态度，如有任何疑问或需求，欢迎与我们的专业团队联系，我们将竭诚为您服务。